목차
Ⅰ클로닝이란?
1.1. 클로닝의 정의 17
1.2. 새로운 유전자의 발굴 18
1.3. 과거의 클로닝 20
1.4. 현재의 클로닝 21
Ⅱ 클로닝을 위한 준비
2.1. 클로닝 설계에 유용한 소프트웨어 27
2.2. Vector, Plasmid, Construct & Kozak consensus sequence 31
2.3. Multiple Cloning Sites (MCS) 36
2.4. 제한효소 (Restriction enzyme; RE)와 Star activity 39
2.5. Agarose gel electrophoresis for nucleic acids 47
2.6. LB (Luria-Bertani) plate 만들기 52
2.7. Competent cells 55
2.8. DNA의 질량을 molar 농도로 바꾸는 법 59
2.9. 새로운 plasmid를 받았을 때 60
2.10. cDNA library 62
Ⅲ 클로닝 첫걸음
3.1. Cut & Paste 67
3.2. DNA sequencing & Direct sequencing 80
3.3. 클로닝을 위한 PCR & Nested PCR 85
3.4. Fill-in (Full & Partial) 94
3.5. Compatible cohesive ends 98
3.6. Methylation 100
3.7. Three-piece ligation 109
3.8. Site-directed mutagenesis 112
3.9. 식물 형질 전환 (Plant transformation) 벡터의 구조 119
3.10. rhizobium radiobacter 형질 전환 123
Ⅳ 클로닝 다음 걸음
4.1. 유전자 중간부분에 다른 DNA를 삽입하는 방법 (Insertion)
4.2. 유전자 중간부분을 삭제하는 방법 (Deletion) 131
4.3. 유전자에 epitope tag을 삽입하는 방법 & CRISPR/Cas9 133
4.4. Translational fusion vs. transcriptional fusion 139
Ⅴ 클로닝 마지막 걸음
5.1. 다른 종에서 유사한 유전자를 cloning하는 방법 143
5.2. RACE (rapid amplification of cDNA ends) 146
5.3. BAC recombineering 149
5.4. Old Trick: partial digestion 153
5.5. 벡터의 변경 155
5.6. 클로닝이 다 됐다고 생각했는데, frame shift가 있을 때 158
5.7. 클로닝의 실제: 억세게 운이 없는 경우 160
Ⅵ 클로닝으로 인한 두통을 덜어주는 방법
6.1. TA cloning & T-vector의 제작 173
6.2. TOPO TA cloning 179
6.3. Gateway cloning 182
6.4. Golden gate assembly & Golden gate를 이용해 푸는 직소퍼즐 185
6.5. In-Fusion Sequence-and Ligation-independent Cloning (In-Fusion SLC) 192
6.6. T4 DNA Polymerase Sequence-and Ligation-Independent Cloning (T4 DNA Pol SLIC) 205
6.7. Non-template PCR cloning 211
Ⅶ Cloner에게 주는 조언
7.1. 클로닝이 안될 때 217
7.2. 클로닝의 정리와 기록 220
Appendix 1. 심화학습을 위한 문헌 224
Appendix 2. 약자 226
Appendix 3. index 228